اسپکتروسکوپی

آزمایش اسپکتروسکوپی

هدف از آنجام آزمایش: تشخیص قندهای (گلوکز و لاکتوز) درغلظت های مختلف

به روش  مولیش

وسایل مورد نیاز: 1- بشر(به تعداد مورد نیاز) 2- ترازوی دیجیتال 3- همزن 4- پیپت

5- لوله آزمایش 6- آبفشان

مواد مورد نیاز: 1- متانول 2- آلفا نفتول 3- گلوکز و لاکتوز به مقدار مورد نیاز

4- آب مقطر 5- سولفوریک اسید

تئوری آزمایش:

طیف‌سنجی (یا طیف‌نمایی یا اسپکتروسکوپی) مطالعه ماده و خواص آن، با بررسی نور، صوت و ذرات گسیل شده، جذب شده یا پراکنده شده از ماده مورد نظر است. طیف‌سنجی به عنوان مطالعه برهمکنش بین نور و ماده نیز تعریف می‌شود

قانون بیر لامبرت:
برای به دست آوردن غلظت نمونه مورد بررسی در طیف سنجی، نیازمند رابطه ای میان میزان نور جذب شده توسط نمونه و غلظت نمونه هستیم که همان قانون بیر لامبرت است. وقتی یک دسته امواج نورانی تکرنگ ازمحیطی وارد محیط یکنواخت دیگر می شود، قسمتی ازآن منعکس و قسمتی جذب محیط دوم و قسمتی هم ازمحیط دوم خارج می شود. رابطه بین شدت نور تابش و خارج شده از محیط، توسط لامبرت (Lambert) در سال 1760 به دست آمد. و بیر (Bear) در سال 1762 درستی آن را درباره محلول ها بررسی نمود و نتیجه گرفت که این قانون درباره محلول ها هم صادق است.

قانون بیر لامبرت یکی از قوانین اصلی در اپتیک است. این قانون تجربی ارتباط شدت نور جذب شده در اثر عبور از ماده همگن بدون پراکندگی را با خصوصیات ماده بیان می‌کند. این قانون بطورکلی به صورت زیر بیان می‌شود رابطه( 1)

که در آن I₀شدت نور اولیه، I شدت نور عبوری و A مقدار جذب ماده، α ضریب خاموشی، l ضخامت سلول و c غلظت ماده است

 

آزمایش مولیش:

آزمایش مولیش یک تست عمومی برای تشخیص وجود کربوهیدرات ها در یک محلول می باشد.اسید سولفوریک غلیظ باعث هیدرولیز اتصالات گلیکوزیدی(پیوند بین قندها) و تبدیل الیگوساکاریدها و پلی ساکاریدها به مونوساکارید می شوند.مونوساکاریدها نیز در حضور اسید سولفوریک غلیظ، آب از دست داده و به فورفورال و یا مشتقات آن تبدیل می شوند که در حضور آلفا نفتل(الکل بزنی) کمپلکس بنفش ایجاد میکند.

 

شرح انجام آزمایش: ابتدا به وسیله تراوز مقادیر مشخصی از گلوگز (10 و 1 گرم) ولاکتوز( 1و 2 گرم) را اندازه گیری می کنیم و درون بشر های معین می ریزیم و با اضافه کردن آب مقطر ،محلول های (10درصد و 1درصد گلوگز ،1و2درصد لاکتوز ) را تهیه می کنیم.و درمرحله بعد دریک بشر با اضافه کردن متانول و آلفانفتول (پودری) محلول آلفانفتول را می سازیم  سپس از هر یک از محلول های قند 3 میلی لیتر را از بشر به درون لوله آزمایش ها می ریزیم وسپس به وسیله پیپت (با آب مقطر تمیز می کنیم) 3قطره از محلول آلفانفتول درون لوله آزمایش ها می ریزیم به اندازه کافی مخلوط می کنیم .همزمان در لوله آزمایش دیگر(محلول شاهد) 3میلی لیتر آب مقطر درون آن می ریزیم مانند مرحله قبلی آلفا نفتول اضافه می کنیم و و سپس به وسیله یک پیپت دیگر 2 میلی لیتر سولفوریک اسید به آرامی به لوله آزمایش ها اضافه می کنیم  مخلوط می کنیم و 5دقیقه صبر می کنیم تا تغییر رنگ لوله آزمایش های محلول را مشاهده کنیم.که محلول حاوی قند تقریبا بنفش و محلول شاهدتغییر رنگ ناچیزی(آبی کم رنگ) پیدا می کند.

 

نتیجه: تغییر رنگ بستگی به غلظت قند محلول ها دارد و می توانیم با توجه به میزان تغییر رنگ محلول ها مقدار قند موجود در محلول را تعیین کنیم